按照《中華人民共和國食品安全法》有關(guān)規(guī)定，為規(guī)范食品快速檢測方法使用，我局組織制定了《蔬菜中敵百蟲、丙溴磷、滅多威等5種農(nóng)藥殘留快速檢測方法（征求意見稿）》，現(xiàn)向社會公開征求意見。請于2017年8月4日前通過電子郵件反饋意見。

　　聯(lián)系人：金紹明、張敏
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蔬菜中敵百蟲、丙溴磷、滅多威等

5種農(nóng)藥殘留快速檢測方法

（征求意見稿）

1　范圍

本方法規(guī)定了蔬菜中敵百蟲、丙溴磷、滅多威等5種農(nóng)藥殘留快速檢測方法。

本方法適用于油菜、菠菜、芹菜、韭菜等蔬菜中敵敵畏、敵百蟲、丙溴磷、克百威、滅多威等5種農(nóng)藥殘留的快速測定。

酶抑制（率）法（分光光度法）

2　原理

在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（乙酰膽堿）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計在412nm處測定吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率。

3　試劑和材料

除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的二級水。

3.1　試劑

3.1.1　丙酮（CH3COCH3）。

3.1.2　磷酸氫二鉀（K2HPO4）。

3.1.3　磷酸二氫鉀（KH2PO4）。

3.1.4　5,5-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）（C14H8N2O8S2）。

3.1.5　碳酸氫鈉（NaHCO3）。

3.1.6　碘化乙酰硫代膽堿（ C7H16INOS）。

3.1.7　pH8.0緩沖溶液：分別稱取11.9g無水磷酸氫二鉀及3.2g磷酸二氫鉀，溶解于1000mL水中，混勻。

3.1.8　顯色劑：分別取160mg 5,5-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）（DTNB）和15.6mg碳酸氫鈉，用20mL緩沖溶液溶解，4℃冰箱中保存。

3.1.9　底物：取125mg碘化乙酰硫代膽堿，加15mL蒸餾水溶解，搖勻后置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。保存期不超過兩周。

3.1.10　乙酰膽堿酯酶：4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

3.2　參考物質(zhì)

3種有機(jī)磷和2種氨基甲酸酯類農(nóng)藥參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1，純度均≥98%。

表1 有機(jī)磷和氨基甲酸酯類參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、

CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量

3.3　標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

3.3.1　克百威、滅多威、敵敵畏、敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1000μg/mL）：冷藏、避光、干燥條件下保存。

3.3.2　丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100μg/mL）：冷藏、避光、干燥條件下保存。

3.3.3　克百威、滅多威、敵敵畏、敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)中間液A（100μg/mL）：精密移取上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1000μg/mL）（3.3.1）各1mL，分別置于10mL容量瓶中，用丙酮（3.1.1）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為100?μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液A。

3.3.4　克百威、滅多威、敵敵畏、敵百蟲、丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)中間液B（1μg/mL）：精密移取標(biāo)準(zhǔn)中間液A（100μg/mL）（3.3.3）及丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100μg/mL）（3.3.2）各1mL，分別置于100mL容量瓶中，用緩沖溶液（3.1.7）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1?μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液B。

4　儀器和設(shè)備

4.1　恒溫水浴鍋。

4.2　天平：感量為 0.01 g和0.1mg。

4.3　分光光度計或相應(yīng)商品化測定儀。

4.4　環(huán)境條件：溫度15℃~35℃，濕度≤80%。

5　分析步驟

5.1　試樣的提取

5.1.1　整株提取法

選取韭菜、芹菜有代表性的樣品，擦去表面泥土，稱取試樣3g（精確至0.01g）置于表面皿中，加入10mL緩沖液（3.1.7），殘缺面不得接觸緩沖液，輕輕振搖50次，靜置2min以上，取上清液備用。

5.1.2　整體測定法

選取油菜、菠菜有代表性的樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，稱取3g（精確至0.01g）放入離心管中，加入10mL緩沖溶液（3.1.7），振搖50次，靜置2min以上，倒出提取液，靜置3min~5min，待用。

5.2　測定步驟

5.2.1　對照液的測定

先于反應(yīng)管中加入3mL緩沖溶液（3.1.7），再加入適量酶液、0.1mL顯色劑，搖勻后于37℃水浴鍋中放置15min。加入0.1mL底物搖勻，立即測定吸光度，3min后再測定一次，記錄反應(yīng)3min的吸光度值的變化?A0。

5.2.2　樣品液的測定

先于反應(yīng)管中加入3mL提取液，其他操作與對照液操作（5.2.1）相同，記錄反應(yīng)3min的吸光度值的變化?At。

5.3　質(zhì)控試驗(yàn)

每次測定應(yīng)同時進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)。

5.3.1　空白試驗(yàn)

稱取空白試樣，按照 5.1 和 5.2 步驟與樣品同法操作。

5.3.2　加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)